Histología- Microscopios (01)

Nos permiten observar mas detalles que los visibles a simple vista.

Limite/Poder de resolución

LR = capacidad de distinguir dos objetos separados

Ojo humano 0.2 mm

Microscopio Óptico 0.2microm

Microscopio Electronico 2-4 nm

*Microscopio Óptico o fotónico

-Simple = una lente --->lupa, gafas

-Compuesto = lentes multiples

El microscopio óptico modifica las propiedades de la luz por sistemas ópticos para ver ampliaciones de la materia

º Constituyentes

-Sistema de Iluminación

1. Fuente luminosa

2. Diafragma de campo

3. Condensador (lente frontal, diafragma de iris, lente auxiliar)

-Sistema Óptico

1. Oculares

2. Tubo del microscopio

3. Objetivos

4. Condensador

-Sistema Mecánico

1. Base

2. Estativo o soporte

3. Platina

4. Revolver

5. Tornillos micro y macrométricos

6. Portacondensador

Imágenes en el microscopio fotónico

Luz = es una forma de energía radiante electromagnética a la cual el ojo es sensible

1. El objeto se coloca entre 2F(doble distancia focal) y F, esta imagen se ve en el tubo del microscopio y es

Real, Invertida(con respecto a la muestra/objeto) y de mayor tamaño

2. El objeto esta entre F y el centro Óptico, esta imagen se forma en la retina y es

Virtual, derecha(con respecto a 1) y de mayor tamaño

---> Microscopio de campo claro

*Se observan cortes no vivos

*Parafina

*Mas común

---> Microscopio de campo obscuro

*Se observan vivos sin fijar ni teñir

*Fondo obscuro y estructuras brillantes

---> Microscopía de contraste de Fase

*Se observan seres vivos

*Tejido no teñido

*Densidades

---> Contraste interferencial diferencial (Normarsky)

*Se observan vivos y no vivos

*Se porducen bajos relieves

---> Microscopio de fluorecencia

*Muestras on autofluoerecencia (espermatosoides y espiroquetas)

*Se utilizan rayos UV

*Fluorecencia secundaria, marcadores de antigenos

Microscopio electrónico

Este trabaja con un has de electrones cuya longitud de onda es 2,000 menor que la de la luz.

MET (microscopio electrónico de transición)

- Alto y bajo voltaje

-Una fuente de filamentos de tungsteno (catodo) emite electrones

-Los electrones son atraídos al ánodo

-La diferencia eléctrica entre el cátodo y el ánodo genera un haz

-El haz atraviesa una serie de lentes electromagnéticos

-Una lente condensadora da forma al haz de electrones

-El haz es aumentado por un lente objetivo y por un lente proyectante

-La imagen final se mira en una pantalla fluorescente o en una placa

MEB (microscopio electrónico de barrido)

-Parecido a un tuo de televisión

-Los electrones son recogidos y procesados para formar una imagen en 3D en un tubo de rayos catódicos

-Explora la superficie (barre)

-Se observa en un monitor

-Se utiliza oro o carbon para cubrir la mezcla y darle propiedades conductoras

Preparación de la muestra histológica

	Microscopio Optico o Fotonico	Microscopio Electrónico de Transferencia
Fijación	Formalina (formaldehido al 37%) ---> Formol (10%) amortiguado a Ph neutro	Glutaraldehido 3%(foraldehido conserva reacciones enzimaticas) en amortiguador de fosfatos (Acido osmico)	*Desnaturaliza proteínas, coagula (endurece) *Detiene el metabolismo *Evita autolisis (enzimas lisosomicas) *Destruye microorganismos patógenos
Lavado en amortiguador
Postfijación		Tetraoxido de osmio al 1%	*Contraste estructural
Lavado en amortiguador
Deshidratación en alcoholes a 4ºC	Soluciones alcohólicas de concentraciones crecientes hasta alcanzar alcohol al 100%	Soluciones alcohólicas de concentraciones crecientes hasta alcanzar alcohol al 100%	*Permite la impregnación/infiltración
Diafanizacion/Aclaramiento	Xileno, Tolueno, Xilol	Oxido de propileno	*Extrae el alcohol
Impregnación/infiltración	Parafina	(epoxica)Resina-oxido de propileno	*La sustancia del aclaramiento es sustituida por la de impregnación
Inclusión	Parafina	Resina encapsulada de glatina polimerizacion a 60º	*Endurecen al tejido para el corte
Corte	Microtomo (5-8 microm)	Ultramicrotomo (60-100nm)
Técnica de sombreado/Tinción	La parafina debe sustituirse por agua, despues se tiñe con H-E (hematoxilina (agua) y eosina(alcohol)) El agua vuelve a sustituirse por alcohol hasta llegar al Xileno otra vez	Sales de metales pesados como uranio y plomo (aumentar electrodensidad)
Fijación		Balzamo de canada